准备制备插件
取出一个1.5 mL离心管，根据不同文库类型准备相应的DNB制备反应混合液1或App DNB制备反应混合液1。
温馨提示：下表的ssDNA文库已经过环化、消化和纯化。
下表中的V与 ssDNA pooling 中的文库投入体积（V）一致。
T7+ FCL PE100或T7+ FCL PE150型号的DNB制备试剂适用于MGI文库：
DNB制备反应混合液1 组分
管盖颜色
体积（μL）
TE缓冲液
96-V
DNB制备缓冲液
96
ssDNA文库
/
V
总体积（μL）
192
T7+ App-D FCL PE100或T7+ App-D FCL PE150型号的DNB制备试剂适用于App文库（TruSeq和Nextera接头）和MGI文库：
App DNB制备反应混合液1 组分
管盖颜色
体积（μL）
TE缓冲液
96-V
App DNB制备缓冲液
96
ssDNA文库
/
V
总体积（μL）
192
将DNB制备反应混合液1或App DNB制备反应混合液1用涡旋振荡器振荡混匀，迷你离心机离心5 s，置于冰上备用。
取出DNB聚合酶混合液Ⅱ（LC），短暂离心5 s，置于冰盒上备用。
注意：DNB聚合酶混合液Ⅱ（LC）需在冰上操作，勿置于室温。勿振荡混匀。使用时需握住试剂管顶部，勿触碰管壁。手掌温度或室温可能会影响酶的活性。
取用1个1.5 mL离心管，根据下表在冰上配制DNB制备反应混合液2：
DNB制备反应混合液2 组分
管盖颜色
体积（μL）
DNB高效聚合酶混合液Ⅰ
180
DNB聚合酶混合液Ⅱ（LC）
7.2
总体积（μL）
187.2
将DNB制备反应混合液2用涡漩振荡器振荡混匀，迷你离心机离心5 s，置于冰上备用。
根据下图及下表，选用合适量程的移液器将准备完成的试剂加入制备插件对应的孔位中：
图 1. 制备插件加样（ssDNA文库） 
制备插件加样 制备插件孔位
对应试剂
加样体积（μL）
M1
DNB制备反应混合液1或App DNB制备反应混合液1
188
M2
DNB制备反应混合液2
177
M3
DNB终止缓冲液
38
注意：如无法立即将制备插件插入测序试剂槽进行测序，应盖上插件管盖，将制备插件置于2 ℃~8 ℃冰箱内暂存。上机测序前需移除管盖。
制备插件不可倾斜，如有试剂粘附在管壁或者管盖上，滑开插件顶端，取出单独的试剂管，盖上管盖，竖直放置试剂管进行短暂离心，将试剂收集至管底。
图 2. 取出制备插件内管 