文库pooling方案

测序仪可同时进行四张载片测序。理论上，一张载片产生的数据量依据型号的不同而不同。有关每张载片产生的数据量的详情，参考  概述  。

具体应用所需的数据量、测序读长及测序Barcode等信息决定了可pooling在一起上机的样本量。然而，每个Barcode产出的数据量会有偏差，建议所需的总数据量不超过理论数据量的90%。

根据以下公式计算pooling的最大样本数：

pooling的最大样本数=每张载片输出的理论数据量×90%每个样本的需求数据量

以下为计算pooling的最大样本数的示例：

• 例1：人类全基因组测序WGS

  如采用PE100测序，每个样本需要100 Gb数据，建议每张载片最多测序21个样本。

  pooling的最大样本数=2400×90%100=21.6≈21

• 例2：每个样本需要50 Gb的数据量

  如采用PE150测序，每个样本需要50 Gb的数据量，建议每张载片最多同时测序64个样本。

  pooling的最大样本数=3600×90%50=64.8≈64

• 例3：混合样本

  如采用PE150测序，有4个WGS样本，每个需要100 Gb数据量。同时还需进行RNASeq样本测序，每个需要50 Gb的数据量。建议每张载片在测序4个WGS样本的同时最多测序56个RNASeq样本。

  pooling的最大样本数RNASeq=3600×90%-4×10050=56.8≈56

样本pooling数计算示例

型号	理论产出数据量（Gb/载片）	每个样本需求数据量（Gb）	Pooling数	每个样本理论产出数据量（Gb）
T7+ FCL PE100	2400	100	21	104~127
T7+ FCL PE150	3600	50	64	52~63
T7+ FCL PE150	3600	WGS：100 RNASeq：50	WGS：4 RNASeq：56	WGS：102~122 RNASeq：51~62